Determinar la glucosa sanguinea

¿QUE ES LA GLUCOSA?

La glucosa es una fuente importante de energía para la mayoría de las células del cuerpo, incluidas las del cerebro.

Los carbohidratos que se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz  se transforman rápidamente en glucosa en el cuerpo.

VALORES NORMALES: 70 a 110 mg/dl

NIVELES ALTOS / HIPERGLUCEMIA:

(arriba de los 180 mg/dl)

•      El alto nivel de azúcar en la sangre

•      Poca producción  de insulina

•      Si la glucosa es mayor de 240 mg/dl, se debe investigar la presencia de cetonas en la orina

NIVELES BAJOS / HIPOGLUCEMIA:(debajo de los70 mg/dl)

•      El azúcar agota con demasiada rapidez

•      Es liberada en el torrente sanguíneo con demasiada lentitud.

•      Se libera demasiada insulina en el torrente sanguíneo.

Examen de orina

• Para poder sacar una mejor deducción acerca del nivel momentáneo de la glucosa en sangre, se recomienda hacer la determinación de glucosa en orina mediante la técnica del “doble vaciaje vesical”. Ya que cuanto más corto es el tiempo de permanencia de la orina en la vejiga, tanto más seguras son las conclusiones que se pueden sacar del valor de la glucosa en sangre. Las determinaciones así realizadas han demostrado ser más prácticas que las realizadas mediante la muestra de orina de una micción espontánea.

• Glucosuria 

Tecnica con tiras.

La determinación de glucosa en orina (glucosuria), es una técnica sencilla e indolora, y ha sido hasta hace relativamente pocos años, la forma más utilizada por las personas con diabetes para controlar su enfermedad. Actualmente es una técnica prácticamente en desuso, ya que la determinación de glucosa en sangre es, también, una técnica sencilla, prácticamente indolora y, aporta una información rápida y exacta de lo que está pasando en ese momento. Además, la determinación de glucosuria presenta una serie de limitaciones (ver más adelante) que deben tenerse en cuenta.

Inconvenientes de la determinación de glucosuria

La medición de glucosa en orina tiene una serie de desventajas respecto a la determinación de glucosa en sangre: 

• Las hipoglucemias no se pueden verificar en la orina.
• Sólo da positivo cuando la cantidad de glucosa en sangre ha superado el "dintel renal". Recordemos que ésta cifra suele ser de 180 mg/dl en una persona adulta sana, pero, puede estar aumentado en personas mayores o en personas que tengan diabetes de muchos años de evolución y, estar disminuido en los niños y embarazadas. Por ejemplo: se pueden tener glucemias superiores a 200 mg/dl o más sin que aparezca glucosuria dando una falsa imagen de compensación que no es real.
• No nos da información de lo que sucede en el momento del análisis, sino de lo que ha estado sucediendo desde que realizamos la última micción (ya que la orina se va acumulando en la vejiga hasta que ésta se llena y nos "pide" que la vaciemos).
• Sólo con la información que proporciona la glucosuria no se pueden hacer ajustes puntuales en el tratamiento.
• Por tanto, es preferible siempre que sea posible, el autoanálisis de la glucosa en sangre que en orina.

¿Cómo se realiza el análisis?

El análisis de glucosuria se realiza mediante tiras reactivas que incluyen la medida de esta parámetro sólo o combinado con la acetona en orina (cetonuria), como ya hemos referido.

Las tiras reactivas para glucosuria se sumergen en la orina recogida previamente en un recipiente limpio. Utilizar las tiras siguiendo cuidadosamente el procedimiento de uso indicado en el prospecto que acompaña a las mismas. El contacto de la orina con los reactivos de la tira producirá un color que se compara visualmente con la escala de la etiqueta del frasco.

El resultado del análisis se puede expresar de forma semi-cuantitativa como negativo y cruces (+), aunque ya es bastante más habitual hacerlo de forma numérica en mg/dl o mMoles/l.

En circunstancias normales el resultado debe ser negativo. A partir de 35-40 mg/dl se considera positivo. En casos extremos los valores pueden alcanzar hasta 1000 mg/dl (1 g/dl) o más.

Para personas diabéticas tratadas con dieta o pastillas, y cuando por razones de habilidad o economía no se aconseja practicar el autoanálisis de glucemia, el autoanálisis de glucosuria puede ser recomendable. Las razones se basan en su coste significativamente inferior y en su simplicidad al no ser una medida invasiva. En estos casos la glucosuria se debe de analizar en la orina obtenida en la micción efectuada transcurridas dos horas o algo más después de la principal comida del día. El objetivo es obtener siempre valores negativos. Si se obtienen valores positivos de forma esporádica deben achacarse a un seguimiento deficiente de la dieta. Si los valores positivos son habituales debe consultarlo con su médico pues muy probablemente requerirá alguna corrección en la terapia.

Los productos más comunes para el análisis de glucosuria son el Diastix de Bayer y el Diabur de Roche. También en España en farmacias existe la alternativa barata de las tiras Inter-Glucosa.

¿Se pueden alterar los resultados?

Si. Algunas sustancias presentes en la orina pueden alterar los resultados. Entre las sustancias que alteran la determinación de glucosa en orina dando falsos negativos, es decir, dando un resultado negativo cuando en realidad sí se está eliminando glucosa por la orina cabe destacar la vitamina C, ya que es muy utilizada en los resfriados y procesos gripales. La vitamina C en cantidades farmacológicas negativiza la determinación de glucosuria mediante tiras reactivas, de modo que puede dar la impresión de "buen control" precisamente en situaciones en las que lo lógico es esperar que la diabetes tienda a descompensarse. Otras sustancias que negativizan los resultados son : los salicilatos a altas dosis, la levodopa (antiparkinsoniano), ácido indolacético y algunos antibióticos (penicilinas, cefalosporinas y tetraciclinas).

• Tipos de técnicas.

La reacción de biuret - En un tubo de ensayo, lugar 1,0 ml de reactivo de biuret + 0,5 ml de la solución de proteína. Compare el color desarrollado en un contexto.

• Reacción de ninhidrina - En un tubo de ensayo 2,0 poner solución de ninhidrina ml + 0,2 ml de la solución de proteína. Hervir durante cinco minutos para comparar contra un blanco.
• Desnaturalización térmica - En un tubo de ensayo, 2,0 ml lugar de la solución de proteína. Llevar la llama a hervir. Observe; separar el sobrenadante (en su caso) para añadir el tampón al precipitado y agitar. 
• Ácido desnaturalización - En un tubo de centrífuga de poner: 1,0 ml de TCA (ácido tricloroacético) al 10% + 1 ml de solución de proteína. Se agita y se observan; centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm para separar el sobrenadante y la reacción de biuret. Añadir al precipitado tapa y agitar.

GLUCOSA

 Método enzimático (GOD-PAD)

INTRODUCCIÓN

 Los carbohidratos se definen como aldehídos y cetonas polihidroxílicos

(aldosas y cetosas, respectivamente). Los carbohidratos simples como la glucosa

se denominan monosacáridos. Dos monosacáridos ligados por un puente llamado

glucosídico forman un disacárido. Más de dos monosacáridos unidos por puentes

glucosídicos se denomina polisacárido. Los carbohidratos de la dieta consisten de

monosacáridos tales como la glucosa, fructosa y galactosa; de disacáridos tales

como la sacarosa, lactosa y maltosa y de polisacáridos tales como el almidón. Las

enzimas intestinales convierten a los disacáridos y polisacáridos en

monosacáridos.

 La principal función bioquímica de la glucosa es la de proporcionar energía

para los procesos de la vida. El adenosín trifosfato ("ATP") es la fuente de energía

universal para las reacciones biológicas. La oxidación de la glucosa por las vías

glucolítica y del ácido cítrico es la fuente principal de energía para la biosíntesis

del ATP.

 El sistema para regular los niveles de glucosa sanguínea funciona para lograr

dos fines. El primero es para almacenar glucosa en exceso en relación a las

necesidades corporales inmediatas en un reservorio compacto (glucógeno) y el

segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera que mantenga el

nivel de glucosa sanguínea. La regulación de la glucosa sanguínea es esencial

para mantener al cerebro, cuya fuente energética primaria es la glucosa,

abastecido por una cantidad constante de la misma. La función de la insulina es

desviar la glucosa extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la

forma de macromoléculas (como el glucógeno, lípidos y proteínas). Es así que la

glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de

necesidad.

 En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en períodos de ayuno, una

serie de agentes hiperglucemiantes actúa en las vías metabólicas intermediarias

para formar glucosa a partir de las macromoléculas almacenadas. De esta forma

las proteínas y el glucógeno son metabolizados para formar glucosa-6-fosfato

(gluconeogénesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hígado y liberada a la

sangre para mantener los niveles de glucosa sanguínea.

 Los agentes hiperglucemiantes más importantes son el glucagón, la epinefrina,

el cortisol, la tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales.

El comportamiento de cada uno de estos agentes es diferente en la regulación de

la glucosa sanguínea; mientras que la insulina favorece el metabolismo anabólico

(síntesis de macromoléculas), estas hormonas, en parte, inducen el metabolismo

catabólico para romper grandes moléculas.

 Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del límite

superior normal para una edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores

altos de glucosa sérica en ayunas se relacionan con suma frecuencia con la presencia de diabetes sacarina, el numero de enfermedades y trastornos

fisiológicos que pueden llevar a incrementos mayores es vasto. El aumento de la

concentración de glucosa sérica se dan en: respuesta a la tensión, enfermedad

de Cushing, diabetes mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crónica,

administración de algunos fármacos como diuréticos clorotiacídicos porque

suprimen la secreción de insulina, coma hiperosmolar no cetónico.

 La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentración de

glucosa en ayunas, menor al límite inferior normal para el grupo de edad y esto

sucede en: enfermedad hepática, desnutrición, posgastrectomía, tolerancia

deficiente a la glucosa, administración excesiva de insulina, hipoglucemia

funcional o espontánea, ingestión de alcohol en ayunas.

 Debido a que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve

anormal sólo cuando hay un trastorno grave de esta interacción, el verificar la

glucosa sérica ayuda a evaluar la función e integridad del sistema.

 La prueba de glucosa en ayunas evalúa de modo aproximado la capacidad del

cuerpo para regular la glucosa y proporciona información acerca de la clase de

anormalidad, si es que la hay. No se tomarán alimentos ni bebidas, excepto agua,

cuando menos por ocho horas antes de tomar la muestra.

OBJETIVOS

 Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su

relación con diversas patologías.

 Determinar la concentración de glucosa en estado basal y posprandial en

una muestra biológica mediante el método enzimático colorimétrico.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

 La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido

de hidrógeno. La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede

medirse apareándolo con un indicador de peroxidasa.

 La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según

las siguientes reacciones:

 GOD

 Glucosa + O2 + H2O H2O2 + Gluconato

POD

 2H2O2 + Fenol + 4-AF Quinona + 4H2O .

 Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa POD = Peroxidasa

4-AF = 4-aminofenazona.

PREPARACIÓN

  MUESTRA CLÍNICA:

 Suero o plasma venoso.

 La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho

horas cuando menos antes de la prueba.

 La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapón rojo para suero el

cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA

anticoagulante para obtener plasma.

 La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el

suero y plasma.

 La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 días a 2-8ºC.

Nota: Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o

fluoruro no afectan los resultados.

 La hemólisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.

 

La muestra es inaceptable si:

a) Si el suero se obtiene turbio.

b) Si la identificación es inadecuada.

c) Si el tubo de recolección no es el adecuado.

d) Cuando se haya excedido el tiempo máximo de análisis permisible.

 No se han observado interferencias por hemoglobina(4 g/L); bilirrubina

 (20mg/L); creatinina (100mg/L), galactosa (1g/L).

REACTIVOS

REACTIVO 1 TRIS pH 7.4 92 mmol/L

 Tampón Fenol 0.3 mmol/L

REACTIVO 2 Glucosa oxidasa 15000 U/L

 Vial de enzimas Peroxidasa 1000 U/L

 4-Aminofenazona 2.6 mmol/L

 

ESTÁNDAR Sol. Glucosa 100 mg/L

CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparación:

 Disolver los enzimas del R.2 en el contenido del R.1.

 Esta solución monorreactiva es estable 1 mes a 2-8ºC ó 7 días a 15 – 25ºC,

al abrigo de la luz.
Nota: Cada reactivo deberá ser etiquetado: colocar las iniciales de la persona que

lo preparó, contenido, concentración, número de lote, fecha de preparación,

fecha de caducidad y requerimientos de almacenamiento.

 No usar reactivos fuera de la fecha indicada.

 No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.

EQUIPO

 Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.

 Centrifuga.

 

MATERIAL

5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.

1 micropipetas de 1.0 mL.

1 Micropipeta de 10µL.

Puntas para micropipeta.

Gradilla.

PROCEDIMIENTO

 

CONDICIONES DE ENSAYO

 Longitud de onda: 505nm (490-550)

 Temperatura: 30/37ºC

 Cubeta: 1cm. Paso de luz

 Ajuste a cero con blanco de reactivo.

 

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

 1. Pipetear en tubos de ensayo:

 Blanco Estándar Muestra Muestra Control

 Estándar -- 10µL -- --

 Muestra -- -- 10µL --

 Muestra Control -- -- -- 10µL

 Reactivo 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

 2. Mezclar e incubar 10 min a 37ºC ó 30 min a temperatura ambiente.

 3. Leer la absorbancia (A) a 505nm.

 4. Coloración estable 30 minutos a temperatura ambiente.

RESULTADOS

 

 CÁLCULOS:  Abs. Muestra

 mg /dL Glucosa = x Conc. estándar.

 Abs. Estándar

 mg/dL x 0.0555 = mmol

 Concentración del estándar: 100 mg/dL.

LINEALIDAD DEL MÉTODO:

 El método es lineal hasta valores de 500 mg/dL.

 Si la concentración de glucosa es superior, diluir la muestra a 1:2 con

solución salina 0.9% y multiplicar el resultado por 2.

VALORES DE REFERENCIA

 mg/dL mmol/L

 Suero o plasma 55-110 3.05 - 6.11

 Neonato nacido a término 30-60 1.07-3.3