miércoles, 13 de marzo de 2013

Introducción a los Carbohidratos


IDENTIFICAR LA IMPORTANCIA DE LOS CARBOHIDRATOS

¢  También  llamados azúcares son compuestos orgánicos más abundantes y los más diversos. Están integrados por carbono, hidrógeno y oxígeno, de ahí su nombre. Son parte importante de nuestra dieta. La dieta está compuesta principalmente por carbohidratos, lípidos y proteínas, de hay su gran importancia en nuestro organismo.

EXISTEN DE DOS TIPOS
¢  Simples: son azúcares de rápida absorción, pueden empezarse a digerir desde la saliva; éstos generan la inmediata secreción de insulina.

¢  Complejos: son de absorción más lenta, y actúan más como energía de reserva.


                          



  • Existen en los tejidos animales y vegetales, en las plantas son producidas por la fotosíntesis. En las células animales los carbohidratos en forma de glucosa.
  • MONOSACARIDOS: Son azucares simples, son los glúcidos mas sencillos, que no se descomponen para dar otros compuestos conteniendo de 3 a 6 átomos de carbono. Ejemplos: glucosa o fructosa
  • DISACARIDOS: son  glúcidos formados por la condensación de 2 azucares monosacáridos iguales o distintos
  1. Sacarosa: unión de una glucosa y una fructosa, también llamada azúcar común.
  2. Lactosa: unión de una glucosa y una galactosa. Es el azúcar de la leche.
  3. Maltosa: unión de dos glucosas, son diferentes dependiendo de la unión entre las glucosas.
  • OLIGOSACARIDOS: Son polímeros de 20 unidades de monosacáridos el grupo mas importante de los oligosacaridos es el de los disacáridos.    
1.      ALIMENTOS: el espárrago, el ajo, la alcachofa, el tomate, la alfalfa, el plátano, etc.  

  • POLISACARIDO: ESTAN UNIDOS POR MAS DE 20 UNIDAES DE MONOSACARIDO SIMPLES
2.      ALIMENTOS: Almidones y dextrinas 



Metabolismo de los carbohidratos


La necesidad de un aporte constante de energía a la célula se debe a que ella lo requiere para realizar varias funciones, entre las que destacan:
a) la realización de un trabajo mecánico, por ejemplo, la contracción muscular y movimientos celulares.
b) El transporte activo de iones y moléculas
c) la síntesis de moléculas.
Para la mayoría de los animales, incluyendo al hombre, la energía útil para la célula es la energía química, la cual se encuentra contenida en los nutrientes (carbohidratos y lípidos, principalmente) que se consumen. A través de un conjunto procesos enzimáticos bien definidos, la célula extrae dicha energía y la hace disponible para que se realicen una gran variedad de procesos celulares, entre los que destacan los encaminados a la síntesis  (anabolismo) y degradación (catabolismo) de biomoléculas, a la suma de ambos procesos se le identifica como 
Metabolismo.



Digestión:
Los carbohidratos más abundantes en los alimentos son el almidón (en productos vegetales) y el glucógeno (en productos animales).

Ambos, junto con otros carbohidratos minoritarios en los alimentos, se convierten en glucosa.
Transporte:
La glucosa se transporta del intestino al hígado y de este órgano al resto de los tejidos por el torrente sanguíneo.

El lactato se transporta del músculo al hígado.
Almacenamiento:
Los carbohidratos se almacenan en forma de glucógeno en hígado y músculo.
Dada su mayor masa, el principal reservorio de carbohidratos es el músculo.

Degradación:
El glucógeno se degrada en la glucogenolisis produciendo glucosa.


La glucosa se degrada en:

– la glucólisis produciendo piruvato y energía.
– la ruta de las pentosas fosfato, produciendo poder reductor y pentosas.
Biosíntesis:
El glucógeno se sintetiza en la ruta conocida como glucogenogenesis.

La glucosa se sintetiza en dos rutas:
– la gluconeogénesis.
– El ciclo de Calvin en la fotosíntesis, a partir del CO2 atmosférico.

GLOSARIO
Glucógeno: Hormona secretada por el páncreas que regula los niveles de azúcar
Glucogenolisis: Es la descomposición del glucógeno en la glucosa.
Glucolisis: es la vía metabólica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y así obtener energía para la célula.
Gluconeogénesis: La gluconeogénesis es la síntesis de glucosa nueva.

Identificar la patología del metabolismo de la glucosa


·         Introducción
La glucosa es el carbohidrato más importante que participa en el metabolismo. Es la fuente de energía obligada para el cerebro, la médula ósea, y el eritrocito, y constituye además, el combustible para el tejido muscular, el hígado, el corazón, los riñones y el tejido intestinal.

·         La Alteración del metabolismo de la glucosa
Es un estado metabólico intermedio, entre la ''normalidad'' y la diabetes. Es factor de riesgo para diabetes y enfermedades cardiovasculares como la hipertensión, derrame cerebral, angina de pecho entre otras. Estas, aunque no estén asociadas directamente con el metabolismo de la glucosa son enfermedades CONSECUENTES a los trastornos que esta posee enfermedades asociadas a la Diabetes. Las complicaciones micro vasculares tardías son la retinopatía, la nefropatía y las neuropatías periférica y autonómica. Las complicaciones macro vasculares incluyen la arteriopatía aterosclerótica coronaria y periférica.
Retinopatía Diabética: es causada por daño a los vasos sanguíneos de la retina, la capa de tejido en la parte posterior del interior del ojo.
Nefropatía Diabética: Es un daño o enfermedad renal que ocurre en personas con diabetes.
Neuropatía Diabética: Es un daño a los nervios del cuerpo que ocurre debido a niveles altos de azúcar en la sangre por la diabetes.
Ø  Hay grupos de sujetos con niveles de glucosa en sangre (glucemia) que, aunque no cumplen con los criterios diagnósticos de la diabetes, son demasiado altos para ser considerados normales. Estos grupos se definen por:
  • Glucemia basal alterada
    Tener glucosa plasmática en ayunas superior a 110 mg/dl (6.1 mmol/l), pero inferior a 126 mg/dl (7.0 mmol/l).
  • Tolerancia anormal a la glucosa
    Tener una glucosa superior a 140 mg/dl (7.8 mmol/l) e inferior a 200 mg/dl (11.1mmol/l), a las dos horas de someterse a una sobrecarga oral de glucosa de 75 gramos.
De acuerdo con la glucemia plasmática basal (en ayunas), se pueden establecer las siguientes categorías:
  • Glucosa basal normal: <110 mg/dl (6.1 mmol/l)
  • Glucosa basal alterada: > 110 mg/dl (6.1 mmol/l) y < 126 mg/dl (7.0 mmol/l)
  • Diagnóstico provisional de diabetes: > 126 mg/dl (7.0 mmol/l). El diagnóstico debe ser confirmado de acuerdo con los criterios vigentes. Las categorías correspondientes cuando se realiza una medición de glucosa plasmática, a las dos horas de someterse a una sobrecarga oral de 75 gramos de glucosa, son:
    • Tolerancia normal a la glucosa: < 140 mg/dl (7.8 mmol/l).
    • Tolerancia anormal a la glucosa: > 140 mg/dl (7.8 mmol/l) y < 200 mg/dl (11.1 mmol/l).
    • Diagnóstico provisional de diabetes: > 200 mg/dl (11.1 mmol/l). El diagnóstico debe ser confirmado de acuerdo con los criterios vigentes.
·         Enfermedades relacionadas con la glucosa
La enfermedad más común relacionada con el metabolismo de la glucosa es la “Diabetes mellitus” que se caracteriza por la presencia de niveles elevados de glucosa en sangre. Otra enfermedad relacionada con el metabolismo de esta sustancia es la obesidad.
La DM es una enfermedad sistémica que se caracteriza por el aumento en los valores de la glucosa en sangre, debida a la poca o nula producción de insulina a nivel del páncreas.  Esta enfermedad  al ser  sistémica  afecta  múltiples órganos y/o sistemas: ojos, riñones, piel, corazón, sistema nervioso, entre los principales.

·         Síntomas
Las  personas  con  diabetes pueden  tener los  siguientes  síntomas: aumento en  el volumen y  frecuencia urinaria, polidipsia (aumento en el volumen de ingesta de líquidos), polifagia (o estar siempre con hambre), prurito, pérdida de peso, visión borrosa, cansancio, debilidad, piel seca, heridas que sanan lentamente.
      Las personas con diabetes pueden tener todos los síntomas, algunos, o ninguno de los arriba descritos.

·         Tipos de la Diabetes
Fundamentalmente se conocen 3 tipos de diabetes: DIABETES  TIPO 1, DIABETES TIPO 2 y la DIABETES GESTACIONAL.

 DIABETES TIPO 1
 Cuando no existe producción de insulina ya que hay destrucción de las células beta ( las células beta producen la insulina en el páncreas),  generalmente son pacientes  jóvenes (menores de 30 años), con  sintomatología muy pronunciada,  delgados,  y el debut de su enfermedad es muy repentino. Antiguamente se le conocía como Diabetes Insulino-dependiente.

DIABETES TIPO 2
Cuando hay resistencia a la insulina y déficit en su secresión por parte del páncreas. Las  personas  con  este  tipo,  generalmente  son  mayores de 30 años,  tienen exceso de   peso, su sintomatología no es muy pronunciada, y el inicio de su enfermedad es de forma insidiosa. Antiguamente se le conocía como Diabetes No Insulino-dependiente.

DIABETES GESTACIONAL
 Es la que se descubre  durante el embarazo, y su diagnóstico es importante para evitar complicaciones maternas o del recién nacido. Este tipo de diabetes supone un riesgo para  la mujer, ya que puede desarrollar diabetes tipo 1 o tipo 2 una vez que ha terminado su embarazo.

·         Diagnóstico
Se sospecha de una persona con diabetes cuando tiene la síntomatología clínica y/o algún factor  de riesgo asociado (antecedentes familiares, obesidad, uso de corticoides, endocrinopatías, etc). Ello se confirma con pruebas de GLUCEMIA, es decir midiendo la glucosa en sangre.

·         Tratamiento
Ø El tratamiento de la Diabetes Comprende:
Ø - La dieta
Ø - El ejercicio Físico
Ø - Los medicamentos: Antidiabéticos orales  e Insulina.  En DM Tipo 1 y Diabetes Gestacional se usa Insulina. En DM Tipo 2 se prefiere iniciar primero con antidiabéticos orales y luego de un tiempo usar insulina, cuando sea necesario.

Ø  Otros medicamentos pueden ser:
Glibenclamida y Metformina
La Glibenclamida se usa para tratar la diabetes tipo 2 (no dependiente de insulina) o la que antes se conocía como diabetes adulta, en particular en las personas cuya diabetes no puede ser controlada exclusivamente con un régimen alimenticio. La glibenclamida baja los niveles de azúcar en la sangre al estimular el páncreas para secretar insulina y ayudar al cuerpo a usarla de manera eficiente.
La Metformina se usa sola o con otros medicamentos, incluida la insulina, para tratar la diabetes tipo 2 (afección en la que el cuerpo no usa la insulina normalmente y, por lo tanto, no puede controlar la cantidad de azúcar en la sangre). La metformina pertenece a una clase de medicamentos denominados biguanidas. La metformina ayuda a controlar la cantidad de glucosa (azúcar) en la sangre. Disminuye la cantidad de glucosa que usted absorbe de los alimentos y la cantidad de glucosa que sintetiza el hígado. Además, aumenta la respuesta del cuerpo a la insulina, una sustancia natural que controla la cantidad de glucosa presente en la sangre. La metformina no se usa para tratar la diabetes tipo 1.

Determinar la glucosa sanguinea


¿QUE ES LA GLUCOSA?

La glucosa es una fuente importante de energía para la mayoría de las células del cuerpo, incluidas las del cerebro.
Los carbohidratos que se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz  se transforman rápidamente en glucosa en el cuerpo.

VALORES NORMALES: 70 a 110 mg/dl

NIVELES ALTOS / HIPERGLUCEMIA:
(arriba de los 180 mg/dl)
      El alto nivel de azúcar en la sangre
      Poca producción  de insulina
      Si la glucosa es mayor de 240 mg/dl, se debe investigar la presencia de cetonas en la orina

NIVELES BAJOS / HIPOGLUCEMIA:(debajo de los70 mg/dl)
      El azúcar agota con demasiada rapidez
      Es liberada en el torrente sanguíneo con demasiada lentitud.
      Se libera demasiada insulina en el torrente sanguíneo.

Examen de orina

  • Para poder sacar una mejor deducción acerca del nivel momentáneo de la glucosa en sangre, se recomienda hacer la determinación de glucosa en orina mediante la técnica del “doble vaciaje vesical”. Ya que cuanto más corto es el tiempo de permanencia de la orina en la vejiga, tanto más seguras son las conclusiones que se pueden sacar del valor de la glucosa en sangre. Las determinaciones así realizadas han demostrado ser más prácticas que las realizadas mediante la muestra de orina de una micción espontánea.
  • Glucosuria 
Tecnica con tiras.

La determinación de glucosa en orina (glucosuria), es una técnica sencilla e indolora, y ha sido hasta hace relativamente pocos años, la forma más utilizada por las personas con diabetes para controlar su enfermedad. Actualmente es una técnica prácticamente en desuso, ya que la determinación de glucosa en sangre es, también, una técnica sencilla, prácticamente indolora y, aporta una información rápida y exacta de lo que está pasando en ese momento. Además, la determinación de glucosuria presenta una serie de limitaciones (ver más adelante) que deben tenerse en cuenta.

Inconvenientes de la determinación de glucosuria

La medición de glucosa en orina tiene una serie de desventajas respecto a la determinación de glucosa en sangre: 
  • Las hipoglucemias no se pueden verificar en la orina.
  • Sólo da positivo cuando la cantidad de glucosa en sangre ha superado el "dintel renal". Recordemos que ésta cifra suele ser de 180 mg/dl en una persona adulta sana, pero, puede estar aumentado en personas mayores o en personas que tengan diabetes de muchos años de evolución y, estar disminuido en los niños y embarazadas. Por ejemplo: se pueden tener glucemias superiores a 200 mg/dl o más sin que aparezca glucosuria dando una falsa imagen de compensación que no es real.
  • No nos da información de lo que sucede en el momento del análisis, sino de lo que ha estado sucediendo desde que realizamos la última micción (ya que la orina se va acumulando en la vejiga hasta que ésta se llena y nos "pide" que la vaciemos).
  • Sólo con la información que proporciona la glucosuria no se pueden hacer ajustes puntuales en el tratamiento.
  • Por tanto, es preferible siempre que sea posible, el autoanálisis de la glucosa en sangre que en orina.
¿Cómo se realiza el análisis?

El análisis de glucosuria se realiza mediante tiras reactivas que incluyen la medida de esta parámetro sólo o combinado con la acetona en orina (cetonuria), como ya hemos referido.

Las tiras reactivas para glucosuria se sumergen en la orina recogida previamente en un recipiente limpio. Utilizar las tiras siguiendo cuidadosamente el procedimiento de uso indicado en el prospecto que acompaña a las mismas. El contacto de la orina con los reactivos de la tira producirá un color que se compara visualmente con la escala de la etiqueta del frasco.

El resultado del análisis se puede expresar de forma semi-cuantitativa como negativo y cruces (+), aunque ya es bastante más habitual hacerlo de forma numérica en mg/dl o mMoles/l.

En circunstancias normales el resultado debe ser negativo. A partir de 35-40 mg/dl se considera positivo. En casos extremos los valores pueden alcanzar hasta 1000 mg/dl (1 g/dl) o más.

Para personas diabéticas tratadas con dieta o pastillas, y cuando por razones de habilidad o economía no se aconseja practicar el autoanálisis de glucemia, el autoanálisis de glucosuria puede ser recomendable. Las razones se basan en su coste significativamente inferior y en su simplicidad al no ser una medida invasiva. En estos casos la glucosuria se debe de analizar en la orina obtenida en la micción efectuada transcurridas dos horas o algo más después de la principal comida del día. El objetivo es obtener siempre valores negativos. Si se obtienen valores positivos de forma esporádica deben achacarse a un seguimiento deficiente de la dieta. Si los valores positivos son habituales debe consultarlo con su médico pues muy probablemente requerirá alguna corrección en la terapia.

Los productos más comunes para el análisis de glucosuria son el Diastix de Bayer y el Diabur de Roche. También en España en farmacias existe la alternativa barata de las tiras Inter-Glucosa.


¿Se pueden alterar los resultados?

Si. Algunas sustancias presentes en la orina pueden alterar los resultados. Entre las sustancias que alteran la determinación de glucosa en orina dando falsos negativos, es decir, dando un resultado negativo cuando en realidad sí se está eliminando glucosa por la orina cabe destacar la vitamina C, ya que es muy utilizada en los resfriados y procesos gripales. La vitamina C en cantidades farmacológicas negativiza la determinación de glucosuria mediante tiras reactivas, de modo que puede dar la impresión de "buen control" precisamente en situaciones en las que lo lógico es esperar que la diabetes tienda a descompensarse. Otras sustancias que negativizan los resultados son : los salicilatos a altas dosis, la levodopa (antiparkinsoniano), ácido indolacético y algunos antibióticos (penicilinas, cefalosporinas y tetraciclinas).

  • Tipos de técnicas.
La reacción de biuret - En un tubo de ensayo, lugar 1,0 ml de reactivo de biuret + 0,5 ml de la solución de proteína. Compare el color desarrollado en un contexto.

  • Reacción de ninhidrina - En un tubo de ensayo 2,0 poner solución de ninhidrina ml + 0,2 ml de la solución de proteína. Hervir durante cinco minutos para comparar contra un blanco.
  • Desnaturalización térmica - En un tubo de ensayo, 2,0 ml lugar de la solución de proteína. Llevar la llama a hervir. Observe; separar el sobrenadante (en su caso) para añadir el tampón al precipitado y agitar. 
  • Ácido desnaturalización - En un tubo de centrífuga de poner: 1,0 ml de TCA (ácido tricloroacético) al 10% + 1 ml de solución de proteína. Se agita y se observan; centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm para separar el sobrenadante y la reacción de biuret. Añadir al precipitado tapa y agitar.






GLUCOSA

 Método enzimático (GOD-PAD)

INTRODUCCIÓN
 Los carbohidratos se definen como aldehídos y cetonas polihidroxílicos
(aldosas y cetosas, respectivamente). Los carbohidratos simples como la glucosa
se denominan monosacáridos. Dos monosacáridos ligados por un puente llamado
glucosídico forman un disacárido. Más de dos monosacáridos unidos por puentes
glucosídicos se denomina polisacárido. Los carbohidratos de la dieta consisten de
monosacáridos tales como la glucosa, fructosa y galactosa; de disacáridos tales
como la sacarosa, lactosa y maltosa y de polisacáridos tales como el almidón. Las
enzimas intestinales convierten a los disacáridos y polisacáridos en
monosacáridos.
 La principal función bioquímica de la glucosa es la de proporcionar energía
para los procesos de la vida. El adenosín trifosfato ("ATP") es la fuente de energía
universal para las reacciones biológicas. La oxidación de la glucosa por las vías
glucolítica y del ácido cítrico es la fuente principal de energía para la biosíntesis
del ATP.
 El sistema para regular los niveles de glucosa sanguínea funciona para lograr
dos fines. El primero es para almacenar glucosa en exceso en relación a las
necesidades corporales inmediatas en un reservorio compacto (glucógeno) y el
segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera que mantenga el
nivel de glucosa sanguínea. La regulación de la glucosa sanguínea es esencial
para mantener al cerebro, cuya fuente energética primaria es la glucosa,
abastecido por una cantidad constante de la misma. La función de la insulina es
desviar la glucosa extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la
forma de macromoléculas (como el glucógeno, lípidos y proteínas). Es así que la
glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de
necesidad.
 En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en períodos de ayuno, una
serie de agentes hiperglucemiantes actúa en las vías metabólicas intermediarias
para formar glucosa a partir de las macromoléculas almacenadas. De esta forma
las proteínas y el glucógeno son metabolizados para formar glucosa-6-fosfato
(gluconeogénesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hígado y liberada a la
sangre para mantener los niveles de glucosa sanguínea.
 Los agentes hiperglucemiantes más importantes son el glucagón, la epinefrina,
el cortisol, la tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales.
El comportamiento de cada uno de estos agentes es diferente en la regulación de
la glucosa sanguínea; mientras que la insulina favorece el metabolismo anabólico
(síntesis de macromoléculas), estas hormonas, en parte, inducen el metabolismo
catabólico para romper grandes moléculas.
 Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del límite
superior normal para una edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores
altos de glucosa sérica en ayunas se relacionan con suma frecuencia con la presencia de diabetes sacarina, el numero de enfermedades y trastornos
fisiológicos que pueden llevar a incrementos mayores es vasto. El aumento de la
concentración de glucosa sérica se dan en: respuesta a la tensión, enfermedad
de Cushing, diabetes mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crónica,
administración de algunos fármacos como diuréticos clorotiacídicos porque
suprimen la secreción de insulina, coma hiperosmolar no cetónico.
 La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentración de
glucosa en ayunas, menor al límite inferior normal para el grupo de edad y esto
sucede en: enfermedad hepática, desnutrición, posgastrectomía, tolerancia
deficiente a la glucosa, administración excesiva de insulina, hipoglucemia
funcional o espontánea, ingestión de alcohol en ayunas.
 Debido a que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve
anormal sólo cuando hay un trastorno grave de esta interacción, el verificar la
glucosa sérica ayuda a evaluar la función e integridad del sistema.
 La prueba de glucosa en ayunas evalúa de modo aproximado la capacidad del
cuerpo para regular la glucosa y proporciona información acerca de la clase de
anormalidad, si es que la hay. No se tomarán alimentos ni bebidas, excepto agua,
cuando menos por ocho horas antes de tomar la muestra.

OBJETIVOS
 Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su
relación con diversas patologías.
 Determinar la concentración de glucosa en estado basal y posprandial en
una muestra biológica mediante el método enzimático colorimétrico.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO
 La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido
de hidrógeno. La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede
medirse apareándolo con un indicador de peroxidasa.
 La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según
las siguientes reacciones:
 GOD
 Glucosa + O2 + H2O H2O2 + Gluconato
POD
 2H2O2 + Fenol + 4-AF Quinona + 4H2O .
 Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona.

PREPARACIÓN
  MUESTRA CLÍNICA:
 Suero o plasma venoso.
 La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho
horas cuando menos antes de la prueba.
 La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapón rojo para suero el
cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA
anticoagulante para obtener plasma.
 La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el
suero y plasma.
 La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 días a 2-8ºC.
Nota: Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o
fluoruro no afectan los resultados.
 La hemólisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.
 
La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.

b) Si la identificación es inadecuada.

c) Si el tubo de recolección no es el adecuado.

d) Cuando se haya excedido el tiempo máximo de análisis permisible.
 No se han observado interferencias por hemoglobina(4 g/L); bilirrubina
 (20mg/L); creatinina (100mg/L), galactosa (1g/L).

REACTIVOS

REACTIVO 1 TRIS pH 7.4 92 mmol/L
 Tampón Fenol 0.3 mmol/L

REACTIVO 2 Glucosa oxidasa 15000 U/L
 Vial de enzimas Peroxidasa 1000 U/L
 4-Aminofenazona 2.6 mmol/L
 
ESTÁNDAR Sol. Glucosa 100 mg/L

CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparación:
 Disolver los enzimas del R.2 en el contenido del R.1.
 Esta solución monorreactiva es estable 1 mes a 2-8ºC ó 7 días a 15 – 25ºC,
al abrigo de la luz.
Nota: 
Cada reactivo deberá ser etiquetado: colocar las iniciales de la persona que
lo preparó, contenido, concentración, número de lote, fecha de preparación,
fecha de caducidad y requerimientos de almacenamiento.
 No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
 No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.

EQUIPO
 Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.
 Centrifuga.
 
MATERIAL
5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10µL.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

PROCEDIMIENTO
 
CONDICIONES DE ENSAYO
 Longitud de onda: 505nm (490-550)
 Temperatura: 30/37ºC
 Cubeta: 1cm. Paso de luz
 Ajuste a cero con blanco de reactivo.
 
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
 1. Pipetear en tubos de ensayo:
 Blanco Estándar Muestra Muestra Control
 Estándar -- 10µL -- --
 Muestra -- -- 10µL --
 Muestra Control -- -- -- 10µL
 Reactivo 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

 2. Mezclar e incubar 10 min a 37ºC ó 30 min a temperatura ambiente.

 3. Leer la absorbancia (A) a 505nm.

 4. Coloración estable 30 minutos a temperatura ambiente.

RESULTADOS
 
 CÁLCULOS:  Abs. Muestra
 mg /dL Glucosa = x Conc. estándar.
 Abs. Estándar
 mg/dL x 0.0555 = mmol
 Concentración del estándar: 100 mg/dL.

LINEALIDAD DEL MÉTODO:
 El método es lineal hasta valores de 500 mg/dL.
 Si la concentración de glucosa es superior, diluir la muestra a 1:2 con
solución salina 0.9% y multiplicar el resultado por 2.

VALORES DE REFERENCIA
 mg/dL mmol/L
 Suero o plasma 55-110 3.05 - 6.11
 Neonato nacido a término 30-60 1.07-3.3